以下是Kevin McKernan(@Kevin_McKernan),Medicinal Genomics的首席科学官和创始人,以及人类基因组计划的前研发主管,对于Nick Jikomes(@trikomes)描述的研究内容的专业翻译:
“我们对一名接种过4次疫苗的患者的结肠肿瘤活检进行了测序……我们可以在那里发现每个细胞有一百个DNA质粒拷贝。它们与辉瑞的并不完全相同,这真是个难解的谜团,但它们确实存在。”
McKernan表示:“我们还没有发表这项工作,但我们对一名接种过4次疫苗的患者的结肠活检进行了测序。接种疫苗一年后,他患上了结肠癌。那天进行了活检,30天后患者去世,我们对死前和死后的样本都进行了测序。”这位科学家和企业家,常被引述为第一个在mRNA COVID疫苗中发现DNA污染的人,补充说:“我们可以在每个细胞中找到一百个质粒拷贝。它们与辉瑞的并不完全相同,这真是个难解的谜团,但它们确实存在。”
“有两种质粒,”McKernan谈及质粒时说,“一种编码棘突蛋白,一种编码核衣壳蛋白。我们不知道核衣壳蛋白质粒是从哪里来的。”(注:病毒的核衣壳是包围核酸——DNA或RNA——内容的蛋白质外壳或衣壳,为病毒基因组提供保护和结构。)
当被问及为什么这些质粒不会与辉瑞在mRNA疫苗制造过程中使用的质粒完全匹配时,McKernan推测:“他们是否有多种[DNA质粒]流通?比如,BioNTech得到的制造质粒与美国制造厂的不同,因为它们在两个不同的地点生产?这是有可能的。他们的实验室或制造过程中是否有污染,他们在E. coli培养罐中放入了错误的质粒,突然间背景就变了?”
“我们必须做好一切来确保我们没有引入这些质粒,我们正在进行各种实验来证明有棘突蛋白表达。但这可能有多种解释。”McKernan补充道。
值得注意的是,DNA质粒——小型、环状、双链DNA分子,能够在细菌细胞内独立复制——在mRNA疫苗的制造过程中被认为是使用的,但应该被清除到监管机构如FDA设定的某个阈值以下。(根据布朗斯通研究所的一篇文章报道,DNA污染的水平可能比允许的水平高出1000倍。文章标题:“疫苗基因文件:一个意外的发现”)
“我们现在正关注一个案例,看起来像是SV40的poly-A信号,这是转录终止信号。我们有证据表明它整合到了21号染色体上,并打断了一个涉及癌症的基因。所以,这个案例看起来非常有趣,”McKernan告诉Jikomes,“这可能是推动这一切的原因。但程序输出了一长串可能的整合,我们需要一一验证哪些是真实的,哪些是人工制品。所以我不想在这方面太过自信。这一点还没有用Sanger测序验证。”
(注:Sanger测序是一种用于确定DNA分子中核苷酸精确顺序的方法;SV40启动子是来自Simian Virus 40的强调控区域,在哺乳动物细胞中的基因构建中驱动高水平的基因表达;poly-A信号是DNA或RNA中的一个序列,标志着基因的结束,促使在mRNA加工过程中添加一个多腺苷尾,这稳定mRNA并有助于其从细胞核中输出。)
“但仅凭拷贝数就表明这些东西没有完全碎裂。对吧?这些质粒不应该在每个细胞中复制到一百个拷贝,”McKernan补充道,“它们不应该以那种水平存在,因为如果你计算疫苗中的含量,当你进行一次注射时,这个人接种了四次疫苗…1.2毫升的辉瑞疫苗…进入了大约87,000毫升的体液体积。所以应该在你的身体内有很大程度的稀释。然而,当我们对肿瘤进行测序和qPCR时,肿瘤的CT值几乎与从小瓶中直接测得的一样高。”(注,qPCR或定量聚合酶链反应是一种用于扩增和同时定量特定DNA分子的技术。“CTs”是循环阈值的缩写;PCR循环阈值是反应中荧光信号超过背景水平的循环数,表示目标DNA扩增已经发生。)
McKernan继续说:
“即使这是整合事件(即DNA质粒整合到基因组中)……我认为这里可能有两种情况:质粒可能在细胞内以游离形式复制,也可能有部分整合。但如果纯粹是整合,质粒已经消失,我们不会期望看到整合的拷贝数高于基因组的拷贝数。对吗?你可能只会有一个整合到一个染色体中。所以它会是人类家基因如RNAP(我们使用的)的一半信号。如果它整合了,你会得到相似的CT值。因为如果它是驱动突变,细胞会扩增,可能只带有一个拷贝的突变。随着肿瘤发展,你可能期望在PCR中看到该区域的CT得分与实际基因组背景相似。但我们没有看到这些。我们看到的CT值远高于RNAP基因,这是人的基因。然后当我们进行测序时,我们看到同样的事情。
“测序的覆盖度在质粒中是100到200X [与] 1X的人类基因组相比。所以它们在这个肿瘤中以非常高的水平存在。这告诉我们它必须在复制。而且这是一个福尔马林固定的组织。所以我们不可能在实验室中撒上质粒来污染它并使其翻译活性。福尔马林就像是把组织碳冻住,就像汉·索洛一样。对吧?所以你不能事后加质粒并让它在细胞中复制,你也不能事后加质粒让它整合。这些事情只能在细胞存活时发生。所以我们相当确定我们已经排除了,这是来自我们自己的可能性。反疫苗者不会把质粒撒在上面来创造故事。
“这显示出某些生物学信号,表明这些质粒在患者活着时就存在。我们不知道它们的来源。他们接种了四次疫苗,其中一次使用的是2020年12月30日的最早疫苗之一。”